Stáva sa s komunitou Schizophyllum: Vytvorte sterilnú kultúru z nájdených húb: 3 kroky (s obrázkami)

2024 Autor: John Day | [email protected]. Naposledy zmenené: 2024-01-30 12:00

Tento návod je zameraný na vysvetlenie, ako vytvoriť sterilnú kultúru huby Schizophyllum Commune (všeobecný názov huba Split Gill) na petriho miske pomocou nájdených húb. Zistilo sa, že obec Schizophyllum má viac ako 28 000 pohlaví, možno ju nájsť na všetkých kontinentoch okrem Antarktídy a má schopnosť (ako ostatné „huby bielej a hnedej hniloby“) degradovať znečistenie narúšajúce endokrinný systém (plasty, priemyselné petrochemické látky napodobňujúce hormóny, ako napr. hnojivo Atrazín, zmäkčovadlo Bisphenol-A alebo syntetický hormón Diethylstilbestrol).

Prejdem technikami identifikácie divých húb, ako vyrobiť Petriho misku s výživným agarom a ako použiť nájdené huby na pestovanie sterilnej izolovanej kultúry vo vašej Petriho miske. Ďalšie inštrukcie z tejto série prechádzajú technikami, ako je genetická identifikácia húb, jednoduché enzymatické testy na testovanie schopnosti húb rozkladať plasty a znečistenie napodobňujúce hormóny a spôsob výroby syra pomocou S. Commune.

Tento projekt vyplynul zo spolupráce Márie Maggice, Pauly Pin a mňa počas rezidencie v HANGAR v Barcelone v Španielsku na jeseň septembra 2018. Ďalšie informácie o projekte nájdete v ~ ~ alebo preskočte všetky Bla Bla a prejdite priamo na krok 1 za návod:)

Obrázky sú zo súborov Schizophyllum Commune Fanzine ~ súbory si môžete zadarmo stiahnuť tu

Počas pobytu boli našimi troma hlavnými cieľmi:

1 ~ Výskum a trávenie vedeckej literatúry o Schizophyllum Commune a jej rôznych interakciách s hormónmi a endokrinnými disruptormi narušujúcimi znečisťujúce látky. S. Commune je jednou z mnohých húb „bielej a hnedej hniloby“so schopnosťou odbúravať znečistenie narúšajúce hormonálne a endokrinné poruchy. Tieto huby sa živia stromami vylučovaním „lignocelulózových“enzýmov z ich zosieťovaných tiel alebo „mycélií“a enzýmy sú schopné rozkladať celulózu a lignín, z ktorých sú stromy vyrobené. Vzhľadom na štrukturálne podobnosti medzi celulózou, lignínom a EDS / hormónmi, ako sú Atrazín, BPA, Estradiol, Diethylstilbestrol a Nonylfenol, môžu „lignocelulózové“enzýmy vylučované hubami tiež rozkladať rôzne toxické látky. Okrem toho S. Commune produkuje imunostimulačné polysacharidy, ktoré sú nápomocné pri prevencii a liečbe rakoviny (schválené v Japonsku na liečbu rakoviny krčka maternice), môžu fermentáciou zlepšiť fytoestrogénne vlastnosti niektorých rastlín, môžu sa použiť namiesto syridla a laktobacilia v procesy výroby syra a produkujú enzýmy rozpúšťajúce trombínovú zrazeninu (užitočné pri liečbe trombózy). Zvláštne je, že tie isté „beta-glukány“, ktoré je možné extrahovať vriacou vodou ako liečebné prostriedky proti rakovine a imunostimulanty, používajú aj ropný priemysel na zvýšenie výnosov ropy, pričom S. Commune viaže v bizarnej spätnej väzbe na produkciu narúšajúcu endokrinný systém. petrochemický je schopný degradovať a naprávať.

2 ~ Vytvorte protokoly DIY a DIWO (urobte to s ostatnými), ktoré zjednodušia tieto zásady pre prácu s EDC a hubami na preklad kodifikovaných vedeckých poznatkov do jazyka, ktorý je prístupnejší. Použite tieto recepty na vzdelávanie, na otázky, na odolnosť voči molekulárnym kolonizáciám a na vytváranie nových príbehov o viacdruhových úspechoch a našej kolektívnej mutagenéze.

3 ~ Vyzvite dominantný cisheteronormatívny, queerphobic diskurz obklopujúci chemikálie narušujúce endokrinný systém (EDC). Aby sme citovali štipendium Malin Ah-Kinga a Evy Haywardovej o týchto problémoch, „Mnoho spravodajských serverov hlási tieto desivé endokrinné príbehy z nášho dvora. V snahe dať tieto problémy do popredia-ako popíšeme v nasledujúcom texte-médiá objasnili Frankensteinovu metamorfózu ktoré ohrozuje sex a sexualitu. Namiesto toho, aby sa riešili mnohé ďalšie zdravotné riziká spojené s toxickým pôsobením, najsenzačnejšie a najpolemickejšie otázky stoja za diskusiou a kritickou reakciou. Vyvoláva otázky: Prečo je sex ústrednejší než rakovina, autoimunitné choroby, a dokonca smrť? Aké kultúrne nervy (z ktorých mnohé sú globalizované) sú spustené? A ako preorientujeme diskusiu od esencializmu, sexizmu a heteronormativity pre tých z nás, ktorí majú feministické obavy? (Toxické pohlavia).

Schizophyllum Commune je jedinečná „huba bielej hniloby“, pretože sa zistilo, že má viac ako 28 000 genetických pohlaví. Táto adaptácia, mnohí teoretizujú, umožnila neuveriteľnú genetickú rozmanitosť tohto druhu, ktorý existuje na každom kontinente na celom svete okrem Antarktídy. Chceli sme osláviť krásnu sexuálnu multiplicitu tohto organizmu ako jeden z príkladov queernes biológie. Dominantný diskurz obklopujúci EDC v médiách a dokonca aj od environmentálnych aktivistov sa vo veľkej miere zameriava na nevedecké príbehy, že tieto molekuly spôsobujú určité sexuality alebo pohlavia, ktoré naša spoločnosť patologizuje, označuje za nenormatívne a často sa snaží ich odstrániť alebo sa im vyhnúť. Sexuálne panické, podivné fobické zameranie verejného protestu na vedecky nerealistické otázky EDC (hormóny a endokrinné disruptory nerobia ľudí divnými ani trans), ale ignoruje všetky devastačne skutočné efekty, ktoré môžeme spájať s EDC: obezita, poruchy štítnej žľazy, niektoré druhy rakoviny, okrem iných zdravotných rizík.

Krok 1: Nájdite komunitu Schizophyllum, ktorá žije vo vašej komunite

Laboratórne sterilné kultúry Schizophyllum Commune je možné zakúpiť za približne 350 dolárov v banke mikrobiologických kultúr, ako je ATCC …, a preto sme sa rozhodli bezplatne kultivovať z lesných húb:)

Mal som to ľahké, pretože som čítal o Schizophyllum Commune a náhodou som si všimol, že jedného dňa rastie na strome pred mojím bytom. Ak nemáte to šťastie, že ste náhodou narazili na S. Commune vo svojom okolí, budete chcieť ísť do zalesnenej oblasti a hľadať „konzolové“huby rastúce na chorých stromoch z tvrdého dreva (stromy, ktoré vyzerajú, že to nerobia) príliš dobre) alebo popadané stromy. S. Commune je jednou z najbežnejších existujúcich húb na celom svete a dá sa nájsť v podstate kdekoľvek, kde je potrebné pestovať tvrdé drevo.

Server Mushroomobserver.org ponúka veľmi podrobný popis toho, kde a kedy pravdepodobne nájdete S. Commune, ako aj to, ako ho identifikovať a ako sa vyhnúť „podobným podobám“, ktoré by mohli viesť k nesprávnej identifikácii:

IDENTIFIKÁCIA: Obec Schizophyllum sa dá ľahko identifikovať podľa rozštiepených žiabrov, hustých vlasov a vejárovitého uzáveru. Čiapka je široká 1 až 4,5 cm a zvyčajne má tvar škrupiny alebo vejára so sivým až belavým povrchom. Bazidiospóry majú veľkosť 5-7,5 × 2. -3 mikrometre. Podobná huba známa ako „Crimped Gill“Plicaturopsis crispa nie je tak široko rozšírená.

HABITAT: Obec Schizophyllum rastie na tvrdom dreve pomocou enzýmov na degradáciu lignínu a spôsobuje „bielu hnilobu“. Nachádza sa teda vo väčšine drevín. Dá sa nájsť celoročne kvôli schopnosti vyschnúť, rehydratovať v lepších podmienkach a potom pokračovať v sporulácii.

Táto huba môže byť parazitická na stromoch s malým priemerom, ktoré sú vystavené stresu z iných faktorov, ako je sucho.

PODOBNÝ PORIADOK: Plicaturopsis crispa alebo „krimpovaná žiabrovka“je podobná štiepanej žiabre. Má tiež plodnicu v tvare škrupiny/vejára. Čiapka je však červenohnedá alebo žltohnedá a spodná strana je veľmi výrazná. Má zvlnené žily ako žiabre, ktoré sú veľmi odlišné od delených žiabrov obce Schizophyllum. Crimped Gill je menej bežný, ale výrazný, keď sa nájde. “

Krok 2: Vyrobte živné agarové platne, na ktorých bude rásť S. Commune

Na izoláciu kultúry S. Commune, ktorú ste zistili, budete potrebovať nejaké Petriho misky plnené jedlom pre huby. Extrakt zo sladu Agar je príprava jedla pre S. Commune alebo „živných médií“, ktoré je možné vykonať z ľahko dostupných prísad. Je to tiež dobrý zdroj potravy, ktorý sa používa pri experimentoch s enzymatickými testami so S. Commune a inými hubami bielej alebo hnedej hniloby ~~ tento proces bude popísaný v inom návode.

BOČNÁ POZNÁMKA: Ak ste mali problém nájsť S. Commune, existuje mnoho ďalších húb z tej istej rodiny, ktoré je možné kultivovať rovnakými procesmi a sú rovnako dobré, ak nie lepšie, pri degradácii znečisťujúcich látok narúšajúcich endokrinný systém. Turkey Tail (Trametes Versicolor) bol nájdený v mnohých štúdiách, ktoré skúmali stovky húb bielej a hnedej hniloby ako najvyšších producentov „lignocelulózových“enzýmov, ktoré degradujú petrochemické znečistenie. Hliva je na tom tiež veľmi dobre.

Moju mikrobiologickú prácu robím v komunitnom biologickom laboratóriu s názvom BUGSS (Baltimore Underground Science Space), kde mám prístup k sklu, digitálnym váham, odmerným valcom, autoklávu (na sterilizáciu médií teplom a tlakom) atď. Laboratóriá, ako sú tieto, majú sa v poslednom desaťročí objavili po celom svete, takže by ste možno chceli pozrieť sa na tento zoznam a zistiť, či sa vo vašom okolí nejaký nenachádza. Ak vo svojej oblasti nemáte skvelé komunitné laboratórium, budete musieť investovať do základného vybavenia, ako napríklad:

1 ~ Digitálna váha na presné meranie vašich prísad

2 ~ Tlakový hrniec na sterilizáciu médií teplom a parou

3 ~ Petriho misky, dá sa kúpiť online veľmi lacno, opakovane použiteľné sklo alebo plast na jedno použitie bude fungovať, ale opätovné použitie je vždy lepšie:)

4 ~ Niektoré poháre na miešanie ingrediencií, sterilizáciu a skladovanie.

Ak nechcete investovať do tohto zariadenia, môžete nájsť vopred naliate agarové platne na extrakcii sladu, ktoré si môžete kúpiť na webových stránkach, ako je Amazon ~ z dlhodobého hľadiska bude drahšie, ak plánujete pokračovať v mikrobiologickej práci.

Existuje už mnoho skvelých sprievodcov a videí na YouTube, ako si doma vyrobiť vlastné petriho misky s živinami. Takže namiesto toho, aby som o tom zachádzal do podrobností, uvediem iba odkaz na pár - a poskytnem recept na 2% sladový extraktový agar, čo je živné médium, ktoré budete používať.

Huby Freshcap: Návod, ako si vyrobiť agarové platne na pestovanie húb doma

Mykoweb: Začíname s pestovaním húb

Agar s technickými údajmi o extrakte zo sladu

2% sladový extraktový agar (MEA) ~~ Recept na 1 liter:

20 g sladového extraktu (bežná ponuka na výrobu piva, dá sa kúpiť online)

15 g agaru (stužovač) - používa sa na varenie, takže ho môžete kúpiť online alebo v niektorých obchodoch s potravinami

1 liter H20 (zvyčajne používam vodu z reverznej osmózy, ktorú je možné kúpiť vo väčšine obchodov s potravinami v galónových džbánoch)

Tento recept je možné ľahko upraviť, ak chcete pripraviť menšie množstvo. Napríklad často robím len 250 ml naraz, takže nakoniec použijem iba 5 gramov sladového extraktu, 3,75 gramu agaru a 250 ml vody.

Krok 3: Očkujte svoje Petriho jedlo hubami

Huba, ktorú vidíte, sa nazýva „plodnica“a je to len malá časť organizmu. Väčšina jeho tela je skrytá v strome (alebo v zemi), pričom konzumuje drevo. Táto časť huby sa nazýva mycélium. Na kultiváciu bieleho vláknitého, chapadlového, rizomatického, myceliálneho tela Schizophyllum Commune na Petriho misku odoberiete vzorku stonky, sterilizujete a umiestnite na platne MEA. Mycélium vyrastie zo vzorky jadra sterilizovaného stonky huby a kolonizuje Petriho misku, pričom vyzerá ako biela vata.

Budete potrebovať:

• Platne so sladovým extraktom (MEA), ktoré ste pripravili v predchádzajúcom kroku
• 70% izopropylalkohol (trecí alkohol) a fľaša s rozprašovačom
• Papierové uteráky
• Skalpel, alebo len holiaci strojček z nehrdzavejúcej ocele, bude fungovať
• kovová pinzeta
• rukavice
• Plameň - Na sterilizáciu nástrojov používam alkoholickú lampu, NonDisjunction má skvelý návod, ako si ho vyrobiť.
• Sterilný povrch na rezanie (na to som použil sterilnú Petriho misku)
• Parafilm, parafínový film používaný na utesnenie Petriho misiek - môžete tiež použiť maskovaciu pásku, ak ju nemáte

STERILNÁ TECHNIKA:

Hlavnou vecou, ktorú chcete mať na pamäti pri pokuse o použitie sterilnej techniky, je to, že do vzduchu nepretržite padajú baktérie a spóry, takže chcete svoje petriho misky udržať čo najviac zakryté. Keď nadvihnete viečka a nalejete médium alebo naočkujete, vždy je najlepšie držať viečko tesne nad miskou, čo vám umožní prístup do vnútra horizontálne, ale veko nad miskou necháte, aby sa do nej nedostali baktérie. Za druhé, sú obrovský konglomerát ľudských, bakteriálnych, hubových a iných organizmov ~~ aj keď to nevidíte, obklopuje vás hustý oblak mikróbov, ktoré difundujú z vášho tela. Váš mikrobióm sa namiesto toho, aby len sedel na povrchu pokožky, rozprestiera do vzduchu ~~oooooo, nikdy nemávnite rukami nad Petriho miskou, ani sa nenakláňajte nad otvorenou miskou, aby ste sa pozreli dovnútra. A noste rukavice, ak máš ich;)

ZAREGISTRUJTE SI POLOSTERILNÝ PRACOVNÝ PRIESTOR

Vyberte si neporéznu pracovnú plochu bez trosiek a odpadu. Miesto postriekajte 70% roztokom izopropylalkoholu a utrite ho papierovou utierkou. Umiestnite plameň do stredu pracovnej oblasti a zapáľte ho. Budete chcieť pracovať čo najbližšie k plameňu, pretože okolo neho vytvára malé sterilné pole. Umiestnite doštičky MEA na jednu stranu a vzorku huby na sterilnú reznú plochu na druhej strane. Bežne používam sterilnú Petriho misku ako sterilný rezný povrch, ako aj opierku na náradie. Nalejte trochu izopropylalkoholu do malého pohára - použijete ho na sterilizáciu čepele a pinzety pri práci.

*¡~ INOCULATE ~!*

Predtým, ako niečo urobíte, sterilizujte svoju čepeľ a pinzetu tak, že ich ponoríte do izopropylovej alchymy a potom ich chvíľu držíte nad plameňom. Po sterilizácii ich položte na sterilný rezací povrch, ak ich položíte. Pinzetou držte stonku húb v kľude a odrežte z nej kus. Vezmite tento kus a odrežte všetky strany tak, aby ste skončili s malou kockou jadra hríbikového stonky a odstráňte všetky vonkajšie povrchy. To pomáha zbaviť sa všetkých ostatných mikróbov, ktoré žijú na hubách, aby nekontaminovali vašu kultúru. Potom ponorte jadro stonky na asi 30 sekúnd do izopropylu, vytiahnite ho a nechajte uschnúť v sterilnom poli plameňa (na sušenie nepoužívajte plameň, huba to zabije). Plameňom znova pinzetu sterilizujte, kým počkáte, kým jadro stonky uschne. Potom jednoducho nadvihnite veko jednej z vašich doštičiek MEA tak, aby ste pinzetu zasunuli zboku, a pomocou sterilizovaných pinzet umiestnite jadro stonky do stredu platne. Platňu zalepte parafilmom a v priebehu niekoľkých nasledujúcich týždňov by ste mali vidieť, ako misku kolonizuje S. Commune mycelium.

Pri práci s divokými vzorkami zvyčajne vyrobím niekoľko tanierov, takže ak dôjde ku kontaminácii, je väčšia pravdepodobnosť, že budem mať aspoň jednu čistú kultúru.